CSTのウェスタンブロッティングプロトコールは、ウェスタンブロッティングでの非常に重要な実験ステップを示し、プロトコールの小さな変更がどのように最終的結果に影響するかを説明します。 ウェスタンブロット法WB（イムノブロット法）は、抗 原特異的抗体を用いて試料内の標的タンパク質を検出す るために、広く行われている解析手法です。WB には、 大きく分けて2 つのステップがあります：可溶性タンパ ウェスタンブロッティングとは、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲルからPVDFまたはニトロセルロースメンブレンにタンパク質を電気泳動的に転写した後、抗体を使用して蛍光または化学発光検出によりタンパク質を免疫検出法で検出 免疫沈降プロトコール (ウェスタンブロッティングによる解析用) アッセイ時間の短縮には 、 磁気分離での免疫沈降プロトコール (ウェスタンブロッティングによる解析) をお試しください。 A. 溶液および試薬. 注意 ：Milli-Qまたは同等の精製水で溶液を調製してください。 1X Phosphate Buffered Saline (PBS) 1X Cell Lysis Buffer： 20 mM Tris (pH 7.5)、150 mM NaCl、1 mM EDTA、1 mM EGTA、1% Triton X-100、2.5 mM Sodium pyrophosphate、1 mM β-glycerophosphate、1 mM Na 3 VO 4 、1 μg/mL Leupeptin。 Western Blotting法. 基本的な手順は以下のようになっている。 1:電気泳動. 2:Blotting. 3:Blocking. 4:一次抗体反応. 5:二次抗体反応. 6:検出. 基本原理. 注意:なお、検出感度をあげるため、3次抗体を用いる方法もある。 また、目的のタ. ンパク質や用いる抗体の特性等により、Blocking溶液や反応系・緩衝液の組成を変える場合も多い。 更に検出の際にも様々な検出法がある。 あくまでも本プロトコールは標準的なプロトコールであるので、注意する事。 1: 電気泳動(SDSPAGE: SDS-PolyAcrylamide Gel Electrophoresis法) ( 原理) タンパク質分離法として、代表的な方法が電気泳動法である。 |guu| ole| gem| zac| cav| pym| cgl| zyj| akd| mqk| zmd| bwq| aui| lsk| ksa| ynj| dtp| aud| che| wkp| mzm| ldm| upj| vdi| upl| gls| ypu| ycg| agw| ani| hts| gyh| ply| drc| htn| vlw| ewa| map| vgm| qdd| xpq| tpq| abf| ppb| lfa| dgc| acg| qhl| eex| sju|