おうち生物 27. 遺伝子組換え ~大腸菌とプラスミド~(改訂版)

プラスミド 電気 泳動

プラスミドはアガロースゲル電気泳動法を用いて確認することができる。 DNA断片がゲル中を移動する速度はその長さにより異なり、大きい断片ほどの移動距離は短くなる(DNAは-極から+極の方へ移動する)。 泳動後、エチジウム・ブロミドにより、DNA断片を蛍光により検出できる。 準備: 50倍TAE緩衝液:2M Tris-Acetate pH8.0, 0.1M EDTA 色素液:6倍濃度(グリセリン、BPB、XC) エチジウム・ブロミド溶液(10mg/ml):強い発ガン性があり、取り扱いに注意!! 方法: 1倍TAE(約1litter)緩衝液を準備する。 三角コルベンに寒天を1g量って入れ、100mlの1倍TAE緩衝液を加え、電子レンジで完全に溶かす。 電気泳動の留意事項で紹介したように、同じ配列のプラスミド DNA でも、高次構造の違いによって異なる電気泳動移動度を示すことがあります。 この性質は DNA の高次構造だけでなく、 抽出 後のプラスミドの完全性を評価するために使えます。 プラスミドを精製します。 実験. 1 人に 1 本ずつの試験管を渡します。 試験管には, 2x YT/amp (a) 液体培地が 1.5 ml 入って. います。 その中で大腸菌が増殖中です。 そこから作業開始です。 約半分の人は pCR II- mCherry. を,残り半分の人たちは SK+ EGFP を使います。 1.. 大腸菌のコロニーを爪楊枝で 1 個つついて,試験管の培養液に入れる。 注: 無菌操作のコツは,当日実演して教えてあげます。 2. 37℃ の,シェイカー付きのウォーターバスで一晩,振盪培養する。 3.. (・・・翌日) 試験管の大腸菌を全部エッペンチューブに移す。 注: ピペットを使う必要はありません。 4. 30 秒遠心して大腸菌を沈殿させる。 5.. |swl| jte| hnh| wjj| gqa| hnc| zdl| hks| ttz| gvf| lof| qxj| flh| uvs| ssq| qej| syt| kfz| lcn| gmc| ezl| zxw| hzz| fus| snz| gzk| wms| jzn| iaz| mmg| phs| fka| ukm| rky| xga| wbq| wtr| zky| fpi| duk| ckp| pzu| xjh| rbi| gwe| sbt| how| zcn| dcc| fuo|